培養(yǎng)基特點(diǎn)：

SIM SF 培養(yǎng)基為澄清淡黃色透明液體，如果一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得渾濁或出現(xiàn)沉淀，請(qǐng)勿使用。

保存條件：

2~8℃避光保存，一旦過期，請(qǐng)勿使用。

穩(wěn)定性及保質(zhì)期：

室溫下一個(gè)星期內(nèi)穩(wěn)定。

自收到之日起， 2~8℃避光保存，六個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。

細(xì)胞凍存：

選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，保證活率大于90%。

制備細(xì)胞凍存液：45%新鮮培養(yǎng)基，45%條件培養(yǎng)基，10%DMSO。

200g離心5分鐘，棄去上清。

用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞凍存密度為1.2~2×107/ml/ml。

迅速轉(zhuǎn)移重懸的細(xì)胞至無菌的凍存管中，每管1~2ml。

將凍存管放入程序降溫盒中，-70℃冰箱放置過夜。

若凍存細(xì)胞需要長(zhǎng)期保存，將其轉(zhuǎn)移至液氮罐中。

細(xì)胞復(fù)蘇：

將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至27℃水浴中，進(jìn)行融化。

將融化的細(xì)胞轉(zhuǎn)至無菌的含5-10ml新鮮培養(yǎng)基的無菌離心管中。

200g低速離心5分鐘，緩慢倒掉上部培養(yǎng)基，不要將沉降的細(xì)胞懸起。

用10-20ml新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，確保重懸后的細(xì)胞密度大于1×106/ml左右。

將重懸的細(xì)胞放入無菌培養(yǎng)瓶中，旋蓋擰松，放在搖床中懸浮培養(yǎng)。

當(dāng)細(xì)胞密度生長(zhǎng)達(dá)到2~4×106/ml時(shí)，可以進(jìn)行傳代，傳代時(shí)細(xì)胞接種密度為0.8-1×106/ml。