Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡(jiǎn)便地檢測(cè)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)品。該試劑盒可通過流式細(xì)胞儀來進(jìn)行懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞的流式凋亡檢測(cè)。那么你知道Elabscience一步法TUNEL流式凋亡檢測(cè)試劑盒怎么用嗎?讓我們一起來看看吧!
一、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 收集細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù),每組取1×106個(gè)細(xì)胞,300×g 離心5 min,棄上清。
注:若樣本為貼壁細(xì)胞,凋亡細(xì)胞會(huì)有部分懸浮于上清中,上清中的細(xì)胞也要收集。
2. 加入200 μL PBS(含 1%BSA)重懸細(xì)胞,加入200 μL Fixation Buffer,室溫固定60 min(推薦使用搖轉(zhuǎn)方式,或每 15 min 混勻一次)。
3. 加入1mL PBS(含 1%BSA),600×g 離心 5 min,棄上清。
4. 加入200 μL Permeabilization Buffer,冰上破膜 10 min。
注:破膜溫度過高或者時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破碎,因此建議Permeabilization Buffer 解凍后放置在 4°C,待使用前取出;另外破膜時(shí)間最長(zhǎng)不要超過15 min。
5. 加入1~2 mL PBS(含 1%BSA)終止破膜,輕輕吹打混勻后,600×g離心 5 min,棄上清。
6. 加入200 μL TdT Equilibration Buffer,輕輕吹打混勻,37°C平衡15 min。
7. 600×g離心5 min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀。
8. 按照分組參考下表配制標(biāo)記工作液,每個(gè)樣本加入100μL反應(yīng)液(充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用)。
組分 | 檢測(cè)樣本 | 陰性對(duì)照 |
TdT Equilibration Buffer | 70 μL | 80 μL |
Labeling Solution | 20 μL | 20 μL |
TdT Enzyme | 10 μL | 0 μL |
注:
① TdT Equilibration Buffer 使用前,室溫靜置直至wan全溶解。冰凍的平衡液融化后可能會(huì)出現(xiàn)鈷鹽結(jié)晶,此為正?,F(xiàn)象。使用前渦旋混勻。
② Labeling Solution 使用前,請(qǐng)置于冰上溶解,待wan全溶解后離心,用槍頭吹打混勻。
③ TdT Enzyme 對(duì)溫度較敏感,請(qǐng)嚴(yán)格保存于-20°C,使用前取出,使用后立即放回。
④ 配制標(biāo)記工作液時(shí),建議不要渦旋。
9. 37°C 避光孵育60 min(每 20 min 輕輕搖晃混勻細(xì)胞)。
10. 加入1mL Stop Solution輕輕吹打混勻,室溫靜置5 min,加入 300~500 μL PBS(含 1%BSA),600×g離心 5 min,棄上清。
11. 加入 200 μL PBS(含 1%BSA)重懸細(xì)胞,上機(jī)檢測(cè)。
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