1.簡介

CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus是一組弱陽離子交換色譜填料。CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus結(jié)合容量和結(jié)合動力學(xué)高于IEX  SepFast  6HF系列。CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus特別適用于需要增加結(jié)合能力的生物分子的一般大規(guī)模純化。

CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus在配體密度、負(fù)載量和單個組分的分離能力之間進(jìn)行了平衡設(shè)計(jì)，適用于大規(guī)模生物制造應(yīng)用。

CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus的基質(zhì)由高度交聯(lián)的 6%瓊脂糖和葡聚糖制成，具有優(yōu)異的流動性。它對生物加工行業(yè)中遇到的大多數(shù)化學(xué)條件都非常穩(wěn)定。

2.產(chǎn)品特性

表1  CM SepFast 6HF Plus的特性

*測試條件：10  mM緩沖液 pH  7.5，上樣5 mg/ml 蛋白質(zhì)，停留時間5分鐘，50%穿透。

**在 32  mm內(nèi)徑色譜柱中，床高 15 cm，室溫下用水測量。

圖1 IEX  SepFast  Media的壓力-流動特性

（備注：將基礎(chǔ)基質(zhì)填充到32 mm內(nèi)徑的柱子中，最終床?為15 cm。流動相是去離子水。測試在室溫下進(jìn)行）

圖2 滴定曲線

3.方法優(yōu)化

建議在載量、流速、結(jié)合pH值、結(jié)合離子強(qiáng)度、洗脫速度和梯度等參數(shù)之間進(jìn)行篩選。由于CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus的快速孔隙可及性，結(jié)合步驟可以在比洗脫步驟更快的流速下完成。建議特別注意優(yōu)化洗脫條件以獲得最佳分離能力。

強(qiáng)離子交換色譜填料可以在較寬的pH范圍內(nèi)保持其電荷（并因此保持其功能），而弱離子交換色譜填料的離解程度和離子交換容量隨pH值而變化。因此，如果使用弱離子交換色譜填料，優(yōu)化pH值更為關(guān)鍵。

通常，在優(yōu)化方法時，平衡組分分離度與工藝產(chǎn)量是主要考慮因素。此外，對于不穩(wěn)定或對剪切力敏感分子的純化，需要優(yōu)化操作條件以平衡產(chǎn)量和對目標(biāo)分子可能造成的損害。

4.裝柱

CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus由高度交聯(lián)的珠狀瓊脂糖制成，具有出色的機(jī)械強(qiáng)度。該色譜填料可以很容易地以任何可能的填充方式填充到任何類型的色譜柱中。典型的包裝壓力高達(dá)3 bar。

5.保養(yǎng)

根據(jù)不同的應(yīng)用，色譜填料可能會被多次使用。如需重復(fù)使用，請參閱以下說明。

（1）再生

每次運(yùn)行后，用高離子強(qiáng)度溶液（例如1M NaCl緩沖液）或增加pH 值。

（2）就地清洗  (CIP)

CIP是一種去除強(qiáng)結(jié)合物質(zhì)的程序，例如再生后殘留在吸附劑表面的脂質(zhì)、內(nèi)毒素和變性蛋白質(zhì)。定期 CIP 可防止污染物在填充床中積聚，并有助于保持色譜柱性能。

應(yīng)根據(jù)存在的污染物類型為每個過程制定具體的 CIP程序。CIP 的頻率取決于各個應(yīng)用的性質(zhì)。

以下信息可作為一般指導(dǎo)：濃度高達(dá)2 M的鹽可用于清除因離子相互作用而結(jié)合的雜質(zhì)。疏水性結(jié)合的污染物可以通過以下試劑去除：1 M NaOH、低比例的非離子洗滌劑（例如0.1-2%）、堿性或酸性條件下的30%  異丙醇（例如在乙酸或磷酸存在下）。也可以探索上述試劑的組合。一般來說，孵育時間應(yīng)該更長（例如從 30 min到2 h），以確保污染物WAN全解離。

（3）消毒

建議使用接觸時間為1 h的0.5?1.0 M NaOH進(jìn)行消毒。

6.儲存

CM離子交換色譜填料SepFast 6HF Plus應(yīng)儲存在20%乙醇中（強(qiáng)陽離子交換色譜填料含有0.2 M NaAC）以防止微生物生長。將色譜填料存儲在4℃到30℃的溫度下。使用前，用至少5床體積的運(yùn)行緩沖液來平衡色譜填料。

7.更多信息

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